WB抗体稀释指南：选对稀释液，优化检测效果

发布时间：2025-06-25 10:26 浏览量：2

在Western Blot（WB）实验中，抗体的正确稀释是获得清晰、特异条带的关键步骤之一。使用合适的稀释液不仅能保证抗体的稳定性和活性，还能显著降低背景噪音，提升实验结果的可靠性。优品生物为您详解WB抗体稀释的科学选择与操作要点。

通用首选：TBST缓冲液

成分： Tris缓冲盐溶液 (TBS) + Tween-20 (常用浓度0.05%-0.1%)。

优点：维持稳定的pH环境，Tween-20有助于减少非特异性结合，降低背景，成本低廉，易于配制。

适用性：绝大多数一抗和二抗的稀释首选，尤其适用于基于辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)系统的二抗。

增强封闭效果：含封闭剂的TBST

成分： TBST + 封闭剂（常用5%脱脂奶粉或3-5%牛血清白蛋白BSA）。

优点：封闭剂能进一步封闭膜上未结合的位点，减少背景信号，提高信噪比。特别适用于背景较高或信号较弱的情况。

选择注意：

脱脂奶粉 (5%)：经济高效，适用于大多数情况。但不适用于磷酸化蛋白检测（因含酪蛋白磷酸化），且可能含痕量IgG或生物素干扰某些系统。

牛血清白蛋白BSA (3-5%)：成分更纯净，不含IgG和生物素，是磷酸化蛋白检测的首选稀释液，也适用于生物素-亲和素系统或背景极高的情况。成本高于脱脂奶粉。

特殊需求稀释液

抗体稳定剂：某些商品化抗体稀释液含有特殊稳定剂（如甘油、蛋白保护剂），可延长抗体工作液在4℃的使用时间（数天至数周）。

无叠氮化物稀释液：若使用HRP系统且需要多次重复使用抗体，应避免使用叠氮化钠（NaN₃）作为防腐剂，因其会不可逆抑制HRP活性。可选择含替代防腐剂（如ProClin™）或现配现用。

抗体最佳工作浓度因抗体种类、批次、靶蛋白丰度、检测系统灵敏度而异。优品生物建议遵循以下步骤：

参考说明书：首先查阅抗体产品说明书推荐的起始稀释比例（如1:1000）。

预实验优化：在推荐浓度基础上，进行梯度稀释实验（如1:500, 1:1000, 1:2000, 1:5000）。在同一张膜上检测已知阳性和阴性样本。

评估标准：选择能给出最强特异性信号同时背景最低最干净的稀释比例。信号过强可能导致条带过曝或弥散，背景过高则掩盖真实信号。

充分混匀：稀释前，将浓缩抗体原液轻轻涡旋混匀（避免剧烈震荡产生气泡）。

精确计算：使用移液器精确量取抗体原液和稀释液。

现配现用：对于含脱脂奶粉或BSA的稀释液，建议现配现用。不含封闭剂的抗体工作液（特别是含稳定剂的）可在4℃短期保存（按说明书建议）。

避免污染：使用洁净容器，避免反复冻融抗体原液，分装保存。

优质封闭液选择：优品生物提供高纯度、低IgG残留的脱脂奶粉和BSA，专为WB优化设计，有效降低背景干扰，是配制抗体稀释液的理想选择。

即用型稀释液：优品生物提供含特殊稳定剂的WB抗体稀释液，方便快捷，延长工作液使用寿命，尤其适合高通量实验。

技术支持：如果您在抗体稀释或WB实验中遇到任何问题，欢迎随时联系优品生物专业技术团队，我们将竭诚为您提供解决方案。

优品贴士：看似简单的稀释步骤，往往是WB成功的关键！选择合适的稀释液并优化浓度，能让您的抗体发挥最佳性能，获得更清晰、更可靠的结果

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